• Penggerusan sampel dalam mortar dingin: Sebagian besar protein merupakan molekul yang mudah rusak bila tidak berada pada kondisi fisiologisnya. Karena itu, untuk mempertahankan struktur dan fungsi protein, maka semua proses isolasi harus dilakukan pada kondisi suhu rendah.
• Penambahan PBST (Phosphate Buffer Saline-Tween)-PMSF (Poly Methyl Sulfonil Fluoride) 5x V : sebagai antiprotease
• Sonikasi 50 Hz 10 menit : Sonikasi dilakukan untuk memecah sel menggunakan gelombang suara frekuensi tinggi, dengan tujuan merusak dinding sel
• Sentrifugasi 6000 rpm 15 menit: Dilakukan untuk memisahkan dinding sel dengan protein terlarut, dengan kata lain untuk mendapatkan “cell free extract”
• Penambahan etanol absolut (1:1) dingin : mengurangi kelarutan protein dalam buffer
• Penambahan Tris Cl (1:1): digunakan sebagai larutan penyangga (buffer)

PURIFIKASI ENZIM

• Pengendapan dengan Amonium Sulfat menggunakan konsentrasi bertingkat (20, 40, 60%) : Presipitasi protein dapat dilakukan dengan penambahan amonimum sulfat pada konsentrasi tinggi secara bertahap  . Saat ammonium sulfat dalam jumlah banyak ditambahkan pada larutan protein, ion-ion garam ammonium sulfat menarik molekul air menjauh dari protein. Hal itu dikarenakan ion pada garam ammonium sulfat memiliki muatan berat jenis lebih besar dibanding protein, sehingga ketika ammonium ditambahkan dan berikatan dengan molekul air, memaksa molekul protein berinteraksi dan mengendapkan molekul ion kecil. Sehingga, ketika penambahan ammonium dalam jmlah cukup, menyebabkan protein terpresipitasi.

• Inkubasi pada suhu  4⁰C: Sebagian besar protein merupakan molekul yang mudah rusak bila tidak berada pada kondisi fisiologisnya. Karena itu, untuk mempertahankan struktur dan fungsi protein, maka semua proses isolasi harus dilakukan pada kondisi suhu rendah (0-4⁰C).
• Sentrifugasi 10000 rpm, 15 menit : Supernatan yang dihasilkan dari presipitasi awal dengan ammonium sulfat dilanjutkan untuk pengendapan ammonium sulfat pada tingkat selanjutnya (20-40%) sedangkan pellet yang didapat dari pengendapan awal dilakukan proses dialisis.

• Dialisis suhu rendah, 12 jam: Dialisis dilakukan untuk menghilangkan  molekul-molekul  yang berukuran kecil dari enzim (dalam hal ini adalah ammonium sulfat). Enzim yang telah diendapkan, dilarutkan dengan larutan buffer fosfat 0.2 M  pH 8 dengan kondisi sama seperti pada awal enzim diekstrak. Larutan kemudian dimasukkan ke dalam kantong selofan dan disuspensikan  dalam buffer  fosfat 0.1 M pH 8, didialisis selama semalam pada kondisi dingin.

• Penambahan etanol absolut dingin (1:1) : untuk mengendapkan enzim. Pelet yang diperoleh merupakan enzim murni.
• Sentrifugasi 10000 rpm, 10 menit: Supernatan yang diperoleh dibuang dan dimana pelet yang diperoleh dikeringanginkan. Sampel protein ditambah dengan sample buffer Tris-Cl dengan perbandingan 1:1 dalam ependorf., bila sampel tidak langsung dipakai dapat disimpan pada suhu -20^oC sehingga struktur dan fungsi protein tidak berubah.

(PS: Hasil praktikum MK. Enzimologi di Laboratorium Biokimia MIPA Universitas Brawijaya Malang…….)

Hope this article can help U, guys!

Salam-DDBiotechnology 2008- by: dee_ta2002@yahoo.com

DUBAI, KOMPAS.com — Seekor unta untuk pertama kali di dunia berhasil dikloning di padang gurun Dubai. Nisar Ahmad Wani, ahli biologi senior di Pusat Reproduksi Unta Uni Emirat Arab, menerangkan, unta betina berusia 6 hari dan berpunuk satu itu diberi nama Injaz. Injaz dilahirkan pada 8 April setelah melewati gestasi atau masa kehamilan selama 378 hari.

Unta hasil kloning ini terlahir dari sel yang ditanamkan di indung telur seekor unta betina. Unta merupakan komoditas berharga di padang gurun Teluk Persia, Uni Emirat Arab. Unta digunakan untuk kebutuhan lomba balap dan alat transportasi. Hewan yang dikenal dengan hasil produk susu rendah kalori itu juga mendatangkan uang hingga jutaan dollar apabila berhasil keluar sebagai juara dalam kontes kecantikan unta yang biasa digelar di Uni Emirat Arab. JIM

Sumber : AP

PS: DD-ers unta kloning pertama di dunia,, din, ndang budhaL neng Dubai kono,,,! Bagi yang berminat, segeRa daftaR ke mbak dewi, whe he he,,Btw, kok negara tujuan penelitian kita sama kayak negara tujuan mbak2 dan mas2 TKi, ya? he

Salah satu cara yang dapat digunakan untuk menyelamatkan lingkungan dari bahaya plastik adalah dengan menerapkan plastik ramah lingkungan (bioplastik/plastik biodegradable). Artinya plastik ini dapat diuraikan kembali oleh mikroorganisme secara alami menjadi senyawa yang ramah lingkungan. Bioplastik merupakan jenis plastik atau polimer yang dibuat dari bahan-bahan biotik seperti jagung, singkong ataupun mikroba. Bioplastik yang tersusun atas komponen-komponen alam dan lebih mudah didegradasi oleh bakteri-bakteri pengurai karena senyawa penyusunnya sudah “dikenal” oleh bakteri-bakteri pengurai. 

 Berbeda dengan plastik konvensional yang sering kita gunakan, yang umumnya terbuat dari minyak bumi, petroleum dan gas alam. Sementara plastik biodegradable terbuat dari material yang dapat diperbaharui, yaitu dari senyawa-senyawa yang terdapat dalam tanaman misalnya selulosa, kolagen, kasein, protein atau lipid yang terdapat dalam hewan. Di samping kelebihannya, bioplastik juga memiliki beberapa kekurangan diantaranya adalah teknologi proses bioplastik lebih mahal dibandingkan biaya produksi plastik konvensional. Bioplastik dinilai kurang memiliki kekuatan dan daya tahan mekanik dibandingkan plastik konvensional. So, wanna join us to save our earth???(dee_ta2002@yahoo.com)